山药试管繁殖中培养基的配制
为了减少山药培养基在配制的过程中的工作量,便于低温贮存,一般要先配出比培养基浓度高10~100倍的母液。在配制母液时,要等各种药品充分溶解后才能混合,混合时要注意各离子的先后次序,把钙离子、锰离子、钡离子、硫酸根、磷酸根错开,以免互相结合,生成硫酸钙、硫酸钡、硫酸钙或磷酸锰等沉淀物。母液的配制要用重蒸馏水等纯度较高的水,药品至少要用化学纯三级(CP),以免带有杂志,防治对培养基造成不利的影响。
母液配制好后,要在母液瓶子上贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期以及1升培养基时所取的量。最后放在2℃~4℃的冰箱中进行贮存,最好在1个月内用完。如果发现霉菌和沉淀物,就要禁止使用。
下面就详细介绍一下山药培养基的配制程序。
1. 配制
培养基配制前要做好准备工作。首先,将母液按照顺序排列好,把配制时所需要的玻璃器皿、量筒、漏斗等都准备好,称好琼脂、蔗糖,配好所需要的生长调节物质,并把重蒸馏水、棉塞、报纸和橡皮筋等备足、烧杯或量筒内要放入一定量的水,避免加入药液的时候药液溅出。其次,按母液顺序量取规定的量,加入所需的生长调节剂,倒入已经融化的琼脂中,再放入蔗糖,定容到所需体积。最后,继续加温,不断搅拌,直至琼脂完全溶解为止。用1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠将养基的氢离子浓度调节在158.5~316.3纳摩尔/升(PH值为6.8~6.5)。
2. 分装
山药培养基配制好后,趁琼脂没有凝固的时候分装到准备接种用的三角瓶或者试管中。分装时,用的较多的是滴管法、虹吸法和漏斗直接分注法。分装时,要防治培养基沾到管壁上沾染杂菌,注入的培养基以占三角瓶或试管容积的1/3~1/4为宜。分装后,要马上塞上棉塞或盖子,做好标记。
3. 灭菌
山药培养基,一般采用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。在120℃、102千帕气压的条件下,持续20分钟即可。高压锅在使用前,要检查锅内是否有一定量的冷水。增压前,要将锅内的冷空气放尽,以便蒸汽均匀地到达培养基的各个部位。消毒时间和压力范围要严格按照规定进行,不能超值,否则容易导致培养基变质、变色和不易凝固。灭菌结束后,切断电源,当压力降到0时,才可以打开放气阀排气。然后,取出培养基,让其凝固(三角瓶平正放置,试管斜面放置)。
山药种植户需要注意的是:山药培养基进行灭菌处理后,要在培养室中培养3天,没有发现污染才可以用于接种;另外,暂时不用的培养基要放在10℃左右的恒温箱中进行保存,且最多只可保存1个月。
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