山药的组织培养繁殖
山药的组织培养繁殖,是新兴起的山药繁殖技术。整个过程由五部分组成:培养基的调配,山药块芽的获取,给山药块芽消毒,接种,大棚假植。因为山药的组织培养,都是在人工调配的培养基上进行的,所以山药培养基的选择和调配是山药组织培养繁殖成功的关键。
1.培养基的调配
山药组织培养常用的培养基是在MS培养基的基础上调配而成的。
MS培养基的组成部分:硝酸钾1900毫克/升、磷酸二氢钾170毫克/升、硝酸铵1650毫克/升、硫酸镁370毫克/升、碘化钾0.83毫克/升、氯化钙440毫克/升、硼酸6.2毫克/升、硫酸锌8.6毫克/升、硫酸锰22.3毫克/升、钼酸钠0.25毫克/升、硫酸铜0.025毫克/升、乙二胺四乙酸二钠37.3毫克/升、氯化钴0.025毫克/升、硫酸亚铁27.8毫克/升、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1毫克/升、肌醇100毫克/升、甘氨酸2毫克/升、盐酸吡哆醇(维生素B2)0.5毫克/升、烟酸(维生素B5)0.5毫克/升、蔗糖30克/升、琼脂8克/升、蒸馏水1升。
MS培养基的配置:在配制过程中,为了防止生成沉淀物质,要先将氯化钙、硝酸铵、硫酸镁、硝酸钾、磷酸二氢钾;肌醇、盐酸吡哆醇、烟酸、盐酸硫胺素;硫酸锌、硫酸锰、硼酸、钼酸钠、碘化钾、硫酸钴、硫酸铜;乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁分四组,分别配成10~100倍的母液,第四组在配制时要在100℃条件下加热10分钟。母液配好后要在表明母液的主要成分、浓度以及调配日期,然后放入冰箱进行冷冻保存。MS培养基配置好后,要用氢氧化钠和盐酸把PH值调到6.5~6.8,然后分别装在三角瓶中,每瓶量为总体积的1/3~1/4,瓶口塞上棉塞,贴上标签,放入高压锅内,加热到120℃,20分钟后取出,冷却后接种或放在5℃左右的恒温箱中保存,保存的时间最多1各月。
2. 山药块芽的获取
山药块芽的获取需要进行山药种薯的切割。它以选取健壮、无病虫害的山药块茎,用200倍液洁尔灭或0.1%高锰酸钾进行消毒,每隔10分钟喷洒一次,最少3次,然后用自来水冲洗干净,晾干,切成每块10~12厘米的段子放在通风处把创面收干。6个小时后放在经过消毒的湿沙中进行催芽,温度保持在20~30℃,20天左右就能获得块芽。
3. 山药块芽的消毒
山药块芽长出来后,用消过毒的刀片切下,并把根须切去,先用少量的洗洁精液浸泡,然后用自来水冲洗干净。进入接种室,将清洁过的块芽用75%的酒精消毒10秒,再用无菌水冲洗3次,然后用0.1%升汞加几滴湿润剂吐温80,灭菌4~6分钟,分两次进行,每次灭菌后都要用无菌水冲洗5次左右,灭菌完成后就可进行外植体接种。
4. 接种
将事先配制好的培养基按常规方法灭菌后冷却待用,培养基由基本培养基(MS)附加2%~3%的蔗糖、0.5~3.0毫克/升的苄基腺嘌呤和0.01~0.1毫克/升的萘乙酸构成。将接种用的刀、镊子、无菌盘等在火焰上烧灼消毒。用镊子将块芽夹到无菌盘中,接种到已灭菌的培养基中,然后放进培养室中培养20~30天,就可长出芽苗。
5. 大棚假植
在块芽继代增值培养结束后,将高达4~5厘米的健壮芽苗从基部切下,将基部可能带有的愈伤组织一并切除。然后将芽苗基部的切口在50毫克/升的NNA溶液中浸泡1~2个小时后,直接扦插入已消过毒的细沙中假植,并喷施稀释的MS无机盐溶液作为养分,2~3周就能见到叶色转绿和相当数量的新根萌发,等到生长稳定后,就可移植到大田中。
山药组织培养繁殖的芽苗,繁殖系数高、生长快、质量高、受外界的影响小。山药种植户如果想要使用这个繁殖方法一定要按照以上的操作进行,避免带来不必要的损失。
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